Studies on Haemto-biochemical and Physiological Parameters in Canine Pyometra

Canine pyometra is an acute or chronic polysystemic diestrual disorder mainly of mature nulliparous bitches. In this retrospective study, an attempt was made to analyse the physiological and haemato-biochemical parameters of a total of 22 affected bitches attended at Sneh Vet lab and Clinic Bhadra, Bhiwani, (Haryana). The findings revealed pyrexia and tachycardia with normal respiration rate in most of the pyometra affected bitches. Amongst the haemato-biochemical parameters, there were reduced levels of haemoglobin, packed cell volume and total erythrocyte count, along with severe leucocytosis, neutrophilia with shift to left, lymphopenia, eosinophilia and elevated BUN and serum creatinine in the bitches affected with pyometra suggesting bone marrow and renal damage. However, the mean values of mean corpuscular volume, mean corpuscular haemoglobin as well as serum ALT and AST were within the normal range, confirming normocytic normochromic anaemia without liver dysfunction.

Mesenteric metastasis of granulosa cell tumor in a bitch: a case report / Metástasis mesentérica de tumor de células de granulosa en una perra: reporte de caso / Metástase mesentérica de tumor das células da granulosa em uma cadela: relato de caso

Abstract Anamnesis: A 5-year-old mixed breed entire bitch was presented with bloody vaginal discharge and abdominal distension. Clinical and laboratory findings: Physical examination and abdominal ultrasonography suggested the presence of a left ovarian tumor. At histopathological examination it was diagnosed as granulosa cell tumor. Treatment approach: An exploratory laparotomy was performed followed by ovariohysterectomy to remove the intra-abdominal mass. Conclusion: The clinical, ultrasonographic and histologic signs in this case support other literature reports. Ultrasonography, in combination with histopathologic analysis is a fundamental tool for detection of ovarian tumors, especially tumors of the granulosa cells.

Resumen Anamnesis: Una perra entera sin raza definida, con cinco años de edad, presentando secreción vaginal sanguinolenta con una distensión abdominal acentuada. Hallazgos clínicos y de laboratorio: El examen clínico y la ultrasonografía abdominal sugirieron la presencia de la neoformación ovárica izquierda. En el examen histopatológico fue diagnosticado como tumor de células de la granulosa. Aproximación terapéutica: Se realizó una laparotomía exploratoria seguida de ovariohisterectomía para eliminar la masa intra-abdominal. Conclusión: Los signos clínicos, ecográficos e histológicos en este caso respaldan otros informes de la literatura. La ecografía, en combinación con el análisis histopatológico, es una herramienta fundamental para la detección de tumores ováricos, especialmente tumores de las células de la granulosa.

Resumo Anamnese: Uma cadela sem raça definida, com cinco anos de idade, não castrada, apresentando secreção vaginal sanguinolenta com acentuada distensão abdominal. Achados clínicos e laboratoriais: O exame clínico e ultrassonografia abdominal sugeriram a presença de neoformação ovariana esquerda. No exame histopatológico foi diagnosticado como tumor de células da granulosa. Abordagem terapêutica: Foi realizada laparotomia exploratória seguida de ovariohisterectomia para remoção da massa intra-abdominal. Conclusão: Os sinais clínicos, ultrassonográficos e histológicos corroboram a literatura, concluindo que a modalidade ultrassonográfica, em associação a análise histopatológica é uma ferramenta fundamental na detecção de neoformações ovarianas, contribuindo significativamente no diagnóstico final.

Uterine secretory activity and histology of prepubertal female dogs in an animal model of partial ablation of endometrial glands development / Atividade secretória uterina e histologia de cadelas pré-púberes em um modelo animal de ablação parcial do desenvolvimento das glândulas uterinas

Inadequate exposure of the female reproductive system to steroids in uterine developmental periods can partially inhibit the development of endometrial glands in dogs. However, the effects of steroids on the formed glands functionality remain unknown, as well as the possible occurrence of endometrial fibrosis. This study aimed to evaluate the secretory activity of endometrial glands in prebubertal female dogs submitted to a protocol of partial ablation of the uterine adenogenesis. Sixteen females of non-specific breed were distributed into two groups; MPA (n=8), females that received applications of medroxyprogesterone acetate every 3 weeks; and C (n=8) untreated control females. Ovariohysterectomy was performed in all animals at the age of 6 months and evaluated the uterine horns by histological and histochemistry exams. The secretion intensity (degrees 1-4) was evaluated using periodic acid-Schiff (PAS) and alcian blue (AB) pH 2.5. Histological evaluation was performed using Masson's trichrome and toluidine blue. Only degree 1 and 2 marks for PAS were observed in both groups, with no difference of uterine secretion intensity between the groups regarding the degrees found. However, the MPA group revealed higher intensity of uterine secretion compared to group C (p<0.05). Staining with AB pH 2.5 also revealed only degree 1 and 2 marks in both groups, with no statistically significance between them. Masson's trichrome staining revealed no marks in the periglandular region in both groups. A higher among of mast cells was observed in the myometrial region of the uterus in both groups. Prepubertal female dogs with partial ablation of the uterine adenogenesis present minimal uterine secretory activity, absence of periglandular fibrosis and increased presence of mast cells in the myometrium compared to endometrium.(AU)

A exposição inadequada do sistema reprodutor feminino a esteróides em períodos do desenvolvimento uterino pode inibir parcialmente o desenvolvimento das glândulas endometriais em cães. Entretanto, não se conhece os efeitos dos esteróides sobre a funcionalidade das glândulas formadas, bem como a possível ocorrência de fibrose endometrial. Objetivou-se avaliar a atividade secretória das glândulas endometriais de cadelas pré-púberes submetidas a protocolo de ablação parcial da adenogênese uterina. Foram utilizadas 16 fêmeas, sem-raça-definida, distribuídas nos grupos MPA (n=8), fêmeas que receberam aplicações de acetato de medroxiprogesterona a cada 3 semanas, e C (n=8), fêmeas controle não tratadas. Aos seis meses de idade, foi realizada ovariohisterectomia em todos os animais, e avaliados os cornos uterinos pelo exame histológico e de histoquímica. Para avaliar a intensidade de secreção (graus 1-4), foram utilizadas periodic acid-Schiff e alcian blue (AB) pH 2,5. Para a avaliação histológica foram utilizados tricrômico de Masson e azul de toluidina. Apenas marcações graus 1 e 2 foram observadas para PAS em ambos os grupos, sem diferença na intensidade de secreção uterina entre grupos com relação aos graus encontrados. Entretanto, o grupo MPA apresentou maior intensidade de secreção uterina em relação ao grupo C (p<0,05). Com relação ao AB pH 2,5, em ambos os grupos também foram encontradas apenas marcações de graus 1 e 2, sem diferença estatística entre grupos. Não foram observadas marcações para a coloração de tricrômico de Masson na região periglandular, em ambos os grupos. Foi observada maior quantidade de mastócitos presentes no útero na região do miométrio, em ambos os grupos. Conclui-se que cadelas pré-púberes com ablação parcial da adenogênese uterina apresentam mínima atividade secretória uterina, ausência de fibrose periglandular e maior presença de mastócitos no miométrio em relação ao endométrio.(AU)

Caracterización de la expresión de galectina-3 mediante inmunohistoquímica enlesiones intraepiteliales de glándula mamaria de perras sin evidencia de tumor / Characterization of galectin-3 expression by immunohistochemistry in mammary intraepithelial lesions in bitches without evidence of tumor

RESUMEN Las lesiones intraepiteliales (LIEs) son anormalidades morfológicas locales de los ductos y los lobulillos de la glándula mamaria que incrementan el riesgo de cáncer. Los programas de detección temprana de cáncer de seno han incrementado la identificación de LIEs. En este sentido, en perras se ha propuesto las LIEs como modelo comparativo con humanos. La galectina-3 está involucrada con la progresión del cáncer en mujeres y hembras caninas pero su papel en el comportamiento biológico de las neoplasias es contradictorio según la célula de origen. El objetivo de este trabajo fue caracterizar la expresión de la galectina-3 por medio de inmunohistoquímica en 19 glándulas mamarias (GM) de seis perras sin evidencia de tumor que contenían 50 tipos de LIEs y 7 carcinomas invasivos, teniendo en cuenta el porcentaje de células positivas y la intensidad del color de la inmunoreacción. No hubo inmunomarcación para galectina-3 en las adenosis, las hiperplasias ductales usuales, la hiperplasia lobular atípica, las lesiones de células columnares, los carcinomas complejos o las hiperplasias complejas. Un papiloma/ adenoma con hiperplasia de acinos tuvo inmunomarcación multifocal en 11-50% de las células con moderada intensidad. Dos carcinomas in situ del subtipo lobular (uno de grado histológico nuclear intermedio y el otro de alto grado) tuvieron marcación en 10% de las células, pero uno tuvo intensidad baja y el otro, intensidad moderada. Los hallazgos sugieren que el papel de la galectina-3 es poco importante en la iniciación de las LIEs, pero sugieren que es una proteína de interés en la progresión de estas lesiones que posiblemente interactua en el comportamiento biológico de esta enfermedad.

ABSTRACT Intraepithelial lesions (IELs) are local morphological abnormalities of the ducts and lobules of the mammary gland that increase the risk of cancer. Programs of early detection of breast cancer have improved the identification of IELs. In canines they have been proposed as a comparative model with human IELs. Galectin-3 is involved with cancer progression in women and bitches but its role in the biological behavior of neoplasias is contradictory depending on the source cell. The aim of this study was to characterize by immunohistochemistry the expression of galectin-3 in 19 mammary glands (MG) from 6 canines without clinical signs of tumor, containing 50 types of IELs and seven invasive carcinomas, taking into account the percentage of positive cells and the intensity of color immunoreaction. There wasn't any immunostaining for galectin-3 in the adenosis, in the usual ductal hyperplasias, in the atypical lobular hyperplasia, in the columnar cell lesions, in the complex carcinomas or in the complex hyperplasias. A papilloma/adenoma with acinar hyperplasia had multifocal staining in 11-50% of the cells with moderate intensity. Two in situ lobular carcinomas (ISLC) (one of nuclear intermediate grade and the other of high nuclear grade) had 10% staining cells, but the intensity was moderate in one of them and low in the other. Findings suggest that the role of galectin-3 is unimportant in the initiation of IELs, but also that it is a protein of interest in the progression of the lesions and that it possibly acts in the biological behavior of the disease.

Efeito da técnica de coleta e do estágio do ciclo estral na recuperação de oócitos de boa qualidade em felinos e caninos domésticos / The effect of recovery technique and stage of estrous cycle on the recoveryof good quality oocytes in domestic felines and canines

A obtenção de oócitos de boa qualidade é essencial para o sucesso de diversas biotécnicas reprodutivas. Objetivou-se determinar o efeito de duas técnicas na recuperação de oócitos de boa qualidade em gatas e cadelas em diferentes estágios reprodutivos. Foram utilizados 43 pares de ovários de gata e 35 de cadela após realização da ovariosalpingohisterectomia eletiva. A fase do ciclo estral foi classificada em inativa, folicular ou luteal. Os ovários da fase folicular foram divididos em três grupos: PUN) punção dos folículos com agulha; PUN+FAT) fatiamento do mesmo ovário já puncionado; e FAT) fatiamento do segundo ovário. Os ovários das fêmeas em fase luteal e inativa foram submetidos ao FAT. Foram obtidos no total 974 oócitos (~23/animal) nas fêmeas felinas e 940 (~27/animal) nas caninas. O fatiamento recuperou número superior (P0,05) entre as técnicas de coleta na qualidade de estruturas recuperadas. A quantidade de oócitos recuperados em cada fase foi similar (P>0,05). Contudo, a fase inativa foi superior à luteal (P<0,05) e semelhante à folicular na quantidade de oócitos de boa qualidade em gatas e não houve diferença em cadelas. Conclui-se que o fatiamento recupera maior quantidade de oócitos, não influenciando em sua qualidade. As fases inativa e folicular recuperam maior quantidade de oócitos de boa qualidade em gatas e não afetam a recuperação em cadelas. Portanto, para otimizar o uso das biotecnologias, deve-se levar em consideração o estágio do ciclo estral em fêmeas felinas e a técnica de coleta utilizada na recuperação de oócitos.

The recovery of good quality oocytes is essential for the success of various reproductive biotechniques. The aim of this study was to determine the effect of two techniques on the recovery of good quality oocytes in queens and bitches at different reproductive stages. A total of 43 pairs of ovaries of queens and 35 of bitches after elective ovariosalpingohisterectomy were performed. The estrous cycle phase was classified as inactive, follicular or luteal. The ovaries of the follicular phase were allocated into three groups: PUN) puncture of the follicles with a needle; PUN + SLI) slicing of the same ovary already punctured; and SLI) slicing of the second ovary. The ovaries of luteal and inactive females were submitted to SLI. A total of 974 oocytes (~23/animal) were obtained in feline females and 940 (~27/animal) in canines females. The SLI technique recovered superior number (P0.05) between the collection techniques in the quality of recovered structures. The number of oocytes recovered in each phase was similar (P>0.05). However, the inactive phase was higher than luteal (P<0.05) and similar to the follicular phase in the quantity of good-quality oocytes in queens and there was no difference in bitches. In conclusion, it is preferable to perform the slicing technique to recover more oocytes in both species. Moreover, in queens it is possible to obtain good quality oocytes in the inactive phase and in bitches the estrous cycle phase does not influence the quality.

Efeito da técnica de coleta e do estágio do ciclo estral na recuperação de oócitos de boa qualidade em felinos e caninos domésticos / The effect of recovery technique and stage of estrous cycle on the recovery of good quality oocytes in domestic felines and canines

A obtenção de oócitos de boa qualidade é essencial para o sucesso de diversas biotécnicas reprodutivas. Objetivou-se determinar o efeito de duas técnicas na recuperação de oócitos de boa qualidade em gatas e cadelas em diferentes estágios reprodutivos. Foram utilizados 43 pares de ovários de gata e 35 de cadela após realização da ovariosalpingohisterectomia eletiva. A fase do ciclo estral foi classificada em inativa, folicular ou luteal. Os ovários da fase folicular foram divididos em três grupos: PUN) punção dos folículos com agulha; PUN+FAT) fatiamento do mesmo ovário já puncionado; e FAT) fatiamento do segundo ovário. Os ovários das fêmeas em fase luteal e inativa foram submetidos ao FAT. Foram obtidos no total 974 oócitos (~23/animal) nas fêmeas felinas e 940 (~27/animal) nas caninas. O fatiamento recuperou número superior (P<0,05) de oócitos. Não houve diferença (P>0,05) entre as técnicas de coleta na qualidade de estruturas recuperadas. A quantidade de oócitos recuperados em cada fase foi similar (P>0,05). Contudo, a fase inativa foi superior à luteal (P<0,05) e semelhante à folicular na quantidade de oócitos de boa qualidade em gatas e não houve diferença em cadelas. Conclui-se que o fatiamento recupera maior quantidade de oócitos, não influenciando em sua qualidade. As fases inativa e folicular recuperam maior quantidade de oócitos de boa qualidade em gatas e não afetam a recuperação em cadelas. Portanto, para otimizar o uso das biotecnologias, deve-se levar em consideração o estágio do ciclo estral em fêmeas felinas e a técnica de coleta utilizada na recuperação de oócitos.

The recovery of good quality oocytes is essential for the success of various reproductive biotechniques. The aim of this study was to determine the effect of two techniques on the recovery of good quality oocytes in queens and bitches at different reproductive stages. A total of 43 pairs of ovaries of queens and 35 of bitches after elective ovariosalpingohisterectomy were performed. The estrous cycle phase was classified as inactive, follicular or luteal. The ovaries of the follicular phase were allocated into three groups: PUN) puncture of the follicles with a needle; PUN + SLI) slicing of the same ovary already punctured; and SLI) slicing of the second ovary. The ovaries of luteal and inactive females were submitted to SLI. A total of 974 oocytes (~23/animal) were obtained in feline females and 940 (~27/animal) in canines females. The SLI technique recovered superior number (P<0.05) of oocytes. There was no difference (P>0.05) between the collection techniques in the quality of recovered structures. The number of oocytes recovered in each phase was similar (P>0.05). However, the inactive phase was higher than luteal (P<0.05) and similar to the follicular phase in the quantity of good-quality oocytes in queens and there was no difference in bitches. In conclusion, it is preferable to perform the slicing technique to recover more oocytes in both species. Moreover, in queens it is possible to obtain good quality oocytes in the inactive phase and in bitches the estrous cycle phase does not influence the quality.

Avaliação hemogasométrica em cadelas com piometra / Hemogasometric evaluation in bitches with pyometra

A piometra é uma afecção comum em cadelas com uma etiologia hormonal associada à infecção bacteriana, levando ao acúmulo de exsudato uterino. Desequilíbrios ácido-base e hidroeletrolíticos são complicações que contribuem para a progressão da doença, o que piora o estado geral da paciente e pode levá-la ao óbito. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar os distúrbios ácido-base e eletrolíticos em cadelas com piometra, além de avaliar se a terapia hídrica pré-cirúrgica (Ringer lactato) é efetiva na correção desses desequilíbrios. Vinte cadelas com piometra foram submetidas à hemogasometria em oito tempos preestabelecidos. Concluiu-se que o distúrbio ácido-base mais frequente foi a alcalose respiratória e que a terapia hídrica no pré-cirúrgico com solução Ringer lactato foi efetiva na correção da acidose metabólica e proporcionou melhora na alcalose respiratória, embora não tenha corrigido quadros de alcalose metabólica.

Pyometra is a common disease in dogs with a hormonal etiology associated with a bacterial infection and leading to accumulation of uterine exudates. Acid-base and electrolyte disturbances are complications that contribute to disease progression, worsening the condition of the patient, possibly leading death. The aim of this study was to characterize the acid-base and electrolyte disturbances in dogs with pyometra, and to evaluate whether preoperative fluid therapy (Ringer's lactate) is effective in correcting these imbalances. Twenty bitches with pyometra were subjected to blood gas analysis in eight pre-set times. It was concluded that the acid-base disorder was the most frequent respiratory alkalosis and fluid therapy in the preoperative Ringer 's lactate solution was effective in the correction of metabolic acidosis, although this has not corrected metabolic alkalosis frames and has provided improved alkalosis breathing .

Identificação imuno-histoquímica de VEGF e IGF-1 em ovários de cadelas no anestro e estro / Immunohistochemical identification of VEGF and IGF-1 in ovaries of bitches on anestrus and estrus

Com o objetivo de verificar a presença de VEGF e IGF-1 nos ovários de cadelas, foram realizadas análises imuno-histoquímicas do estroma cortical; teca e granulosa de folículos secundários, terciários e terciários pré-ovulatórios luteinizados; e ovócitos de folículos primários, secundários e terciários de ovários de cinco cadelas em anestro (Anest) e cinco em estro (Est). A identificação das fases do ciclo estral foi realizada por citologia vaginal associada a dosagem plasmática de progesterona. Os ovários foram submetidos a tratamento imuno-histoquímico para identificação de VEGF (anticorpo primário PU 360-UP, Biogenex, USA; diluição 1:30) e IGF-1 (anticorpo primário PabCa, Gro-Pep, Austrália; diluição 1:100). Determinou-se um índice de imunomarcação (IM), para cada tecido avaliado, pela razão entre a área positivamente marcada dividida pela área total analisada. Para os ovócitos, verificou-se imunomarcação positiva ou negativa. As comparações de IM entre tecidos foram realizadas pelo teste de Wilcoxon (diferentes tecidos em mesmo grupo) ou Mann-Whitney (mesmo tecido entre diferentes grupos), todas no nível de 5% de significância. VEGF e IGF-1 foram identificados, de forma semelhante (P>0,05), em todas as estruturas avaliadas em ambos os grupos experimentais. Conclui-se que esses fatores de crescimento estão presentes em cadelas no anestro e estro, no estroma cortical ovariano, folículos em diferentes estádios de desenvolvimento e ovócitos.(AU)

In order to verify the presence of VEGF and IGF-1 in the ovaries of bitches, immunohistochemical analyzes of the cortical stroma; theca and granulosa of secondary, tertiary and tertiary luteinized preovulatory follicles; and oocytes of primary, secondary and tertiary follicles of ovaries from five bitches in anestrous (Anest) and five in estrus (Est) was performed. The identification of the phases of the estrous cycle was performed by vaginal cytology associated with the measurement of plasma progesterone. The ovaries were treated for immunohistochemical identification of VEGF (PU 360 primary antibody-UP, Biogenex, USA, dilution 1:30) and IGF-1 (primary antibody PabCa, Gro-Pep, Australia; 1:100 dilution). The immunostaining index (MI) was determined for each tissue by the ratio of positively marked area divided by total analyzed area. For oocytes immunostaining was determined as positive or negative. Comparisons of IM between tissues were performed with the Wilcoxon test (deferent tissues in the same group) or Mann-Whitney test (same tissue between different groups), all at 5% significance level. VEGF and IGF-1 have been similarly identified (P>0.05) in all structures evaluated in both groups. It is concluded that in bitches in estrus and anestrous these growth factors are present in ovary cortical stroma, follicles at different stages of development and oocytes.(AU)

Influence of anestrus and diestrus stages of oocyte on meiotic competence in bitches / Influência das fases de anestro e diestro na competência meiótica oocitária de cadelas

The bitch has reproductive peculiarities that differentiate it from other species. Several experiments have been conducted to establish efficient protocols for maturation; however, the results appear to be unsatisfactory. In this respect, the reproductive female donor should be considered, since it can be a factor of variability of findings in this species. The objective of this study was to evaluate the relationship between the estrous cycle phases phase diestrus and anestrus on canine oocyte in vitro maturation (IVM). The ovaries were transported in sodium chloride 0.9% solution, and were cut into phosphate-buffered saline (PBS) and the cumulus-oocyte complexes (COCs) selected in tissue culture medium (TCM), supplemented with 199 HEPES. A total of 469 grade 1 oocytes were collected from bitches in anestrus and diestrus. These selected oocytes were transferred to the maturation medium for a period of 72 hours, then subjected to hyaluronidase solution and stained with Hoechst 33342 to assess nuclear configuration. The comparison of anestrus and diestrus phase showed no differences (p > 0.05) between the nuclear maturation stages. Thus, the phase of the estrous cycle did not influence the in vitro maturation of canine oocytes, increasing the rates of M-II in this species.

A cadela apresenta particularidades reprodutivas que a diferencia de outras espécies. Diversos experimentos têm sido realizados visando estabelecer protocolos eficientes para a maturação, entretanto os resultados mostram-se insatisfatórios. Nesse aspecto, a fase reprodutiva da fêmea doadora deve ser considerada, já que pode ser um fator de variabilidade dos achados ate então presenciados nessa espécie. O objetivo deste estudo foi avaliar a influencia das fases do ciclo estral (anestro e diestro) na maturação in vitro (MIV) de cadelas. Os ovários foram transportados em solução de cloreto de sódio 0,9% e seccionados em solução salina fosfato tamponado (PBS) e os complexos cumulus-oócito (COCs) selecionados em meio de cultura de tecidos (TCM) 199 suplementado com HEPES. Foram obtidos 469 oócitos grau 1 de cadelas em anestro e diestro. Esses oócitos selecionados foram transferidos para o meio de maturação por um período de 72 horas, sendo posteriormente submetidos a solução de hialuronidase e corados com HOESCHT 33342 para avaliação da configuração nuclear. A comparação das fases de anestro e diestro não revelou diferença (p > 0,05) entre os estágios de maturação nuclear. Dessa maneira, a fase do ciclo estral não influenciou na maturação in vitro de oócitos caninos, incrementando os índices de M-II nesta espécie.

Effect of transport temperature of ovaries on in vitro maturation of canine oocytes collected in different stages of the estrous cycle / Influência da temperatura de transporte de ovários na maturação in vitro de oócitos caninos coletados em diferentes estágios do ciclo estral

This study evaluated the influence of estrous cycle stage and transport temperature of ovaries on in vitro maturation of canine oocytes. The bitches were categorized into two groups based on stage of estrus cycle: diestrus or anestrus. One ovary of each pair collected was transported in saline solution at 4°C while the other was transported at 37°C. Thus, ovarian tissue was sliced in PBS to release cumulus oocyte complexes (COCs). A total of 345 COCs (n = 186 oocytes from ovaries of bitches in anestrus and 159 in diestrus) were cultivated in TCM 199 supplemented with HEPES, sodium pyruvate, cysteine, follicle stimulating hormone (FSH), human chorionic gonadotropin (hCG), estrogen (E2) and epidermal growth factor (EGF). After 72h of maturation, the COCs were denuded, fixed and stained to assess nuclear maturation. The Fisher test was applied to examine the differences between the groups. The significance level adopted was 0.05. The oocytes obtained from the ovaries from bitches in diestrus transported at 4°C shown increased frequency of oocytes in metaphase II stage than those maintained at 37°C (p 0.01). Similarly, there was increased frequency of oocytes in metaphase II (11.1%) stage from the ovaries of bitches in anestrus and transported at 4°C, than those maintained at 37°C (p 0.05). It was concluded that transport temperature influences the results of canine oocyte viability and in vitro maturation, regardless of reproductive stage of the female.

Foi avaliada a influencia do ciclo estral e temperatura de transporte de ovários na maturação in vitro de oócitos caninos. As cadelas foram categorizadas em dois grupos baseados no estagio do ciclo estral anestro ou diestro. Um ovário por par coletado foi transportado em solução fisiológica 0,9% a 4°C enquanto o outro foi transportado a 37°C. Então, os ovários foram seccionados em PBS para a liberação dos complexos cumulus oocito (COCs). Um total de 345 COCs (n = 186 oocitos obtidos de cadelas em anestro e 159 em diestro) foi cultivado em TCM 199 suplementado com HEPES, piruvato de sódio, cisteina, hormônio folículo estimulante (FSH), gonadotrofina coriônica humana (hCG), estrógeno (E2) e fator de crescimento epidermal (EGF). Apos 72h de maturação, os COCs foram desnudados, fixados e corados para avaliação da maturação nuclear. O teste de Fisher foi utilizado para avaliar as diferenças entre os grupos. O nível de significância adotado foi de 0,05. Os oócitos obtidos de cadelas em diestro transportados a 4°C apresentaram maior frequência de oócitos no estagio de metáfase II (21,1%) que os mantidos na temperatura de 37°C (p 0,01). De forma similar, houve maior frequência de oócitos nos estágios de metáfase II (11,2%) nos ovários obtidos de cadelas em anestro e transportados a 4°C que nos ovários mantidos a 37°C (p 0,05). Concluiu-se que a temperatura de transporte influencia os resultados de viabilidade oocitária canina e a maturação in vitro, independentemente do estagio reprodutivo da fêmea.

Prognostic markers of canine pyometra / Marcadores prognósticos na piometra canina

The pyometra is a disease that affects middle age and elderly female dogs during diestrus. Hormonal, microbiological, biochemical and hematological aspects are well described. However, few studies have evaluated the role of each in the prognosis of canine pyometra. The aim of this study was to identify markers associated with clinical worsening of dogs with pyometra. We prospectively evaluated 80 dogs with pyometra treated surgically. Group 1 consisted of dogs that were discharged within 48 hours after surgery and Group 2 consisted of those who required prolonged hospitalization or died. The findings of hematological, biochemical and blood lactate levels were compared between groups and variables such as bacterial multidrug resistance, systemic inflammatory response syndrome (SIRS), hyperlactatemia and increased creatinine were analyzed through the dispersion of frequencies between groups. Among the variables studied, the presence of SIRS and elevated serum creatinine >2.5mg/mL were effective in predicting the worsening of the disease and can be used as prognostic markers of canine pyometra...

A piometra é doença que acomete as fêmeas da espécie canina de meia-idade a idosa durante o diestro. Aspectos hormonais, microbiológicos, hematológicos e bioquímicos são bem descritos. Entretanto, são poucos os estudos que avaliam o papel de cada um desses no prognóstico da piometra canina. O objetivo deste estudo foi identificar marcadores associados ao agravamento clínico de cadelas com piometra. Foram avaliadas prospectivamente 80 cadelas com piometra tratadas cirurgicamente. O grupo 1 foi composto por cadelas que receberam alta até 48 horas de pós-operatório, e o grupo 2 por aquelas que necessitaram de internamento prolongado ou morreram. Os achados hematológicos, bioquímicos e os níveis do lactato sanguíneo foram comparados entre os grupos, e variáveis como multirresistência bacteriana, síndrome da resposta inflamatória sistêmica (SIRS), hiperlactatemia e aumento da creatinina foram analisadas por meio da dispersão de frequências entre os grupos. Entre as variáveis estudadas, a presença de SIRS e a elevação da creatinina sérica >2,5mg/mL foram eficazes em predizer o agravamento da doença e podem ser utilizadas como marcadores prognósticos da piometra canina...

Efeito do fator de crescimento epidermal (EGF) na maturação in vitro de oócitos caninos / Effect of epidermal growth factor (EGF) on in vitro maturation of canine oocyte

Este trabalho leve o objetivo de avaliar a influência do EGF na maturação in vitro (MIV) de cadelas. Realizou-se o transporte dos ovários em solução de cloreto de sódio 0,9%, que foram seccionados em solução salina fosfato temponado (PBS) e os complexos cumulus oócitos (COCs) selecionados em meio de cultura de tecidos (TCM) 199 suplementado com HEPES. Foram coletados 405 oócitos grau 1 de cadelas em anestro e diestro. Os oocitos provenientes das duas fases do ciclo estral foram submetidos a dois tratamentos: meio com adição de 10ng/mL do fator de crescimento epidermal (EGF) (T) e meio sem suplementação (C). Depois de 72 horas de maturação, os COCs foram desnudados, fixados e corados com HOESCHT 33342 para avaliação da maturação nuclear. Os oócitos obtidos dos ovários da fase de diestro do grupo T demonstraram maior porcentagem (18,8%) de oócitos no estágio de metáfase II (M-II), em relação ao grupo C (1,3%) (p < 0,01). Nos oócitos obtidos da fase de anestro houve diferença (p < 0,05) entre os grupos, observando-se menor parcela (4,1%) de oócitos no estágio de vesícula germinativa (VG) no grupo T, quando comparado ao grupo C (16,1%). Comparando-se as diferentes fases reprodutivas, em meios suplementados com EGF, foi observada diferença (p < 0,05) apenas nos oócitos obtidos da fase de diestro em relação ao estágio de M-II. Dessa maneira, a suplementação no meio de maturação na concentração de 10 ηg/mL, neste estudo, exerceu influência positiva apenas na MIV de oócitos caninos oriundos da fase de diestro, incrementando os índices de M-II nessa espécie.

This work aimed to evaluate the influence of EGF on canine oocyte in vitro maturation (IVM). We carried out the transport of the ovaries in sodium chloride 0.9% solution, which were cut into phosphate-buffered saline (PBS) and the cumulus oocyte complexes (COCs) selected in tissue culture medium (TCM), supplemented with 199 HEPES. A total of 405 grade 1 oocytes were collected from bitches in anestrus and diestrus. Oocytes from the two phases of estrous cycle were subjected to two treatments: medium with addition of 10 ηg/mL epidermal growth factor (EGF) (T) and medium without supplementation (C). After 72 h of maturation, COCs were denuded, fixed and stained with Hoechst 33342 to assess nuclear maturation. The oocytes obtained from the ovaries of the diestrus phase of the T group demonstrated higher percentage (18.8%) of oocytes at metaphase II stage (M-II) than C group (1.3%) (p < 0.01). The oocytes from anestrus phase demonstrated difference (p < 0.05) between the groups, observing smaller proportion (4.1%) of oocytes at the stage of germinal vesicle (GV) in group T compared to group C (16.1%). Comparing the different reproductive status in media supplemented with EGF difference (p < 0.05) was observed only in oocytes diestrus phase relative to the stage of M-II. Thus, supplementation on maturation medium at a concentration of 10 ηg/mL of EGF in this study had positive influence only on IVM of canine oocytes obtained from diestrus phase, increasing the levels of M-II in this species.

Leiomioma ovariano, tumor de células da granulosa e ovário policístico em cadela: uma rara associação / Ovarian leiomyoma, granulosa cell tumor and polycystic ovary in a bitch: a rare association

This case describes a rare case of ovarian leiomyoma associated with granulosa cell tumor and polycystic ovary and in a fifteen-year-old mongrel female dog.

Efeitos cardiorrespiratórios da metadona, pelas vias intramuscular e intravenosa, em cadelas submetidas à ovariossalpingo-histerectomia / Cardiorespiratory effects of methadone, by intramuscular or intravenous injection, in female dogs submitted to ovariohysterectomy

A metadona é um opioide pouco utilizado na medicina veterinária, e há, ainda, questionamentos quanto ao seu uso. Desse modo, comparou-se o emprego da metadona, administrada pelas vias IM e IV, e avaliaram-se seus efeitos sobre as características cardiorrespiratórias e os tempos de extubação e recuperação em cadelas submetidas à ovariossalpingo-histerectomia. Utilizaram-se 16 cadelas, pré-medicadas com levomepromazina, 0.6mg/kg, IM. Após 20 minutos, a indução anestésica foi feita com propofol, 5mg/kg, IV, e a manutenção com isoflurano. Transcorridos 10 minutos, os animais receberam metadona, 0.3mg/kg, pelas vias IM - grupo GIM - e IV - grupo GIV. As mensurações das frequências cardíaca (FC) e respiratória (FR), pressão arterial média (PAM), temperatura esofágica (TE), pressão parcial de dióxido de carbono (EtCO2) e saturação de oxi-hemoglobina (SpO2) foram registradas antes da administração do opioide (T0), após 20 minutos (T1) e a cada 10 minutos da administração até 60 minutos (T2 a T5). Usou-se a análise de perfil (5%). Com relação à FC, PAM, FR, EtCO2, TE e SpO2, não foram observadas diferenças significativas entre grupos e momentos. Observaram-se tempos de extubação e recuperação maiores no GIV. É possível concluir que a administração IV e a IM da metadona não produzem alterações nas características cardiorrespiratórias em cadelas.

Methadone is a little used opioid in veterinary practice, and there are still questions about its use. The objective of this study was to evaluate the effects of intramuscular (IM) or intravenous (IV) administration of methadone on cardiopulmonary parameters and times of extubation and recovery in female dogs submitted to ovariohysterectomy. Sixteen adult female dogs were used and premedicated with levomepromazine (0.6mg/kg, IM). After 20 minutes, propofol (5mg/kg, IV) was used for induction and anesthesia was maintained with isoflurane. After 10 minutes, methadone at 0.3mg/kg was administered intravenously in IVG and intramuscularly in IMG. The measurement of heart (HR) and respiratory rates (RR), median arterial pressure (MAP), esophagic temperature (ET) and concentration of end-tidal carbon dioxide (PE'CO2) was performed immediately before the administration of the opioid (T0), after 20 minutes (T1) and then at 10-minute intervals (T2, T3, T4 and T5). The statistical analysis used was profile (5%). HR, APM, RR, PE'CO2, BT and SpO2 did not differ significantly among times or between groups at any time. Times of extubation and recovery were higher in IVG. It is possible to conclude that IV and IM administration of methadone did not produce changes in the cardiorespiratory parameters of that specie.

Estudo retrospectivo de ovariossalpingo-histerectomia em cadelas e gatas atendidas em Hospital Veterinário Escola no período de um ano / Retrospective ovariosalpingohisterectomy study in bitches and queens assisted at a Veterinary School Hospital during one year

Realizou-se um estudo retrospectivo das indicações de ovariossalpingo-histerectomia - eletiva e terapêutica - no período de um ano. Foram analisados 193 prontuários de cadelas e gatas atendidas em Hospital Veterinário Escola, entre março de 2010 e março de 2011, levando em consideração a espécie, a idade e o uso ou não de anticoncepcional. Constatou-se que a demanda de OSH com caráter terapêutico (78,8%) é consideravelmente mais alta que a eletiva (21,2%). Observou-se que as anormalidades reprodutivas detectadas com maior frequência foram piometra (53,36%) e complicações obstétricas (25,38%) e que o uso de anticoncepcional foi o fator relevante para o delineamento desses quadros.

An ovariosalpingohisterectomy procedure indication - elective and therapeutic - retrospective study was conducted during one year. Record files from 193 bitches and queens assisted at a Veterinary School Hospital between March 2010 and March 2011 were analyzed, considering species, age and contraceptive use. It was possible to conclude that the therapeutic OSH demand (78.8%) is remarkably superior to the elective OSH request (21.2%). It was also observed that the most frequently detected reproductive abnormalities were pyometra (53.36%) and gestational complications (25.38%), and also that the use of contraceptives is a relevant factor for those events.

The relationship between vaginal mucous electric resistance and plasma progesterone concentration for optimal mating time in Beagle bitches / 동물의과학연구지

The objective of this experiment was to assess the relationship between electrical resistance of the vaginal mucosa and plasma progesterone for optimal mating time in the bitch. Eight mature beagle bitches were examined, and we observed eight times of estrus. Vaginal electric resistance was recorded weekly using a Draminski ovulation detector in anestrus, and daily in estrus. Plasma progesterone concentration was estimated by radioimmunoassay. In the bitch, incline in vaginal electric resistance (376.20 +/- 105.63 units) showed a closely association with the onset of proestrus. Ovulation day was determined as the first day when plasma progesterone concentration increased above 5.0 ng/ml (Day 0). On Day 0, vaginal mucous electric resistance was 438 +/- 132 units. Vaginal mucous electric resistance showed a slight decrease or was maintained until Day 0. However, it showed an explosive increase, and peaked on Day 1~3, which was above 600 units. Two of eight cases peaked on Day 1, three of eight cases were revealed on Day 2, and others were revealed on Day 3. After Day 4, resistance showed a rapid drop to below 600 units and reached 200 units on Day 8. The optimal mating time was determined when vaginal mucous electric resistance was above 600 units.

Concentração de lactato e glicemia em cadelas e neonatos nascidos de cesariana / Lactato concentration in bitch and canine neonates born through cesarean section

Avaliaram-se a concentração de lactato e a glicemia em sete cadelas em trabalho de parto submetidas à cesariana e em seus respectivos neonatos. O lactato materno foi mensurado utilizando-se medidor portátil e pelo método enzimático colorimétrico. Nos neonatos avaliou-se também o peso ao nascimento. Os valores de lactato materno e neonatal foram estatisticamente diferentes, sendo mais elevado nos neonatos. Ao nascimento, as cadelas e os neonatos encontravam-se normoglicêmicos, e não se observou correlação entre a glicemia de ambos. Os valores de lactato obtidos pelo o analisador portátil (3,5±0,6mmol/L) foram mais altos do que os obtidos pelo método enzimático colorimétrico (1,6±0,6mmol/L). Observou-se correlação significativa entre o peso do neonato e a concentração de lactato, isto é, os filhotes de menor peso apresentaram maior concentração de lactato.

This work evaluated the concentration of lactate and blood glucose in seven bitches in labor subject to caesarean section and in their newborns. The lactate concentration was measured using a portable analyzer and enzymatic colorimetric method. In neonates, the birth weight was evaluated. The maternal and neonatal lactate values were statistically different, being higher in newborns. At birth, the bitches and the newborns had normal glucose status, and no correlation was observed between blood glucose in either. The lactate concentration obtained by the portable analyzer (3.5±0.6mmol/L) was higher than that obtained with the enzymatic colorimetric method (1.6±0.6mmol/L). There was significant correlation between the neonate weight and lactate concentration and in puppies with lighter weight there was a higher concentration of lactate.

Pseudo-hermafroditismo masculino em cadela / Male pseudohermaphroditism in bitch

A case of male pseudo-hermaphrodite in a six-month-old Pinscher dog with mild signs of agression towards other dogs is reported. The animal presented fibrous mass in clitorial region, with structure similar to a diminutive penis. Testicles were found in the abdominal cavity, uterus had normal size and localization and hypertrophic clitoris was seen during exploratory laparotomy. The histopathological examination revealed testicular tissue, composed of hypotrophic seminipherous tubules and exuberant stroma and uterus with normal histological appearance. Moreover, the animal presented high levels of testosterone.

Mummified papyraceous fetuses in the abdominal cavity of an elderly female dog with pyometra / Fetos papiráceos em cavidade abdominal de fêmea canina idosa acometida por piometra

This paper reports on a rare case of fetal papyraceous mummification after asymptomatic uterine rupture in an elderly female dog with pyometra. The patient had a history of mating six months before the examination but no apparent signs of gestation or parturition. Exploratory laparotomy was used to identify a rupture of the left uterine horn and the presence of cystic endometrial hyperplasia and pyometra. Two mummified papyraceous fetuses were observed in the abdominal cavity and had adhered to the spleen, pancreas, intestine and omentum. Ovariehysterectomy and corrective surgery were performed. The patient had remained healthy after uterine rupture until a new estrous cycle and the development of pyometra. Bitches that are 10 years old or more are predisposed to implantation failure, pregnancy or parturition problems and they should not be breed to avoid complications.

Relatou-se um caso raro de mumificação fetal papirácea após ruptura uterina assintomática em uma cadela idosa, acometida por piometra. A paciente apresentava histórico de cópula seis meses antes do exame clínico, sem sinais de gestação ou parturição. Na laparotomia exploratória identificaram-se ruptura do corno uterino esquerdo e presença de hiperplasia endometrial cística e piometra. Foram identificados dois fetos mumificados papiráceos na cavidade abdominal, aderidos ao baço, pâncreas, alças intestinais e omento. Realizou-se ovarioisterectomia e cirurgia corretiva. A paciente manteve-se compensada após ruptura uterina, até início de um novo ciclo estral e desenvolvimento de piometra. Cadelas idosas são predispostas à falha na implantação embrionária, problemas durante gestação e parturição, e devem ser excluídas da reprodução para evitar complicações.

Detection of mutations within exons 4 to 8 of the p53 tumor suppressor gene in canine mammary glands / Identificação de mutações nos exons 4 a 8 do gene p53 supressor de tumor em glândulas mamárias caninas

Fifteen female canines with mammary tumors and 6 normal females were used to study mutations in exons 4 to 8 of the p53 gene. DNA samples from the tumors, respective adjacent normal mammary tissue and mammary glands from healthy animals were sequenced and analyzed for the presence of mutations. Mutations were found in 71.8% of the samples and the most frequent were missense mutations. The most attacked exons in the mammary tumor were 5, 7 and 8, with 23.4, 31.6 and 23.4% mutations, respectively. Canine mammary tumors are related to mutations in gene p53 and mutations mostly occur in the region of the protein that is linked to the DNA in the cell nucleus, which can change the functionality of the cell and propitiate tumor growth. Despite being macroscopically normal, the mammary tissue adjacent to the tumors has mutations that can lead to recurrence if not removed together with the tumor.

Para estudar as mutações nos exos 4 a 8 do gene p53, foram utilizados 15 tumores mamários, mamas normais das mesmas cadelas e seis mamas de cadelas normais. O DNA extraído das amostras de tecido foi sequenciado e analisado para a presença de mutações. Em 71,8% das amostras obtidas foram observadas mutações, sendo as "missense" as mais frequentes. Os exons mais comprometidos foram 5, 7 e 8 com 23,4, 31,6 e 23,4% de mutações, respectivamente. O estudo conclui que tumores mamários caninos têm relação com mutações no gene p53 e que as mutações ocorrem com maior frequência nas regiões da proteína que estão ligadas ao DNA no núcleo celular. Isto pode alterar a funcionalidade da proteína e propiciar o crescimento do tumor. As mamas adjacentes aos tumores, apesar da aparência macroscópica normal, apresentaram mutações, que podem representar recidivas se a mama não for retirada juntamente com o tumor.